蛋白质组学工具能够识别单一蛋白质对细胞生物学的研究和应用非常重要。在这里,我们表明纳米孔单分子肽读者敏感单{\ textendash}在单个多肽氨基酸替换。拉上DNA-peptide共轭通过DNA解旋酶生物纳米孔MspA Hel308。阅读的离子电流信号通过单一的纳米孔使歧视{\ textendash}氨基酸替换单读取。分子动力学模拟结果表明这些信号从排斥和孔隙大小绑定。我们也证明能力{\ textquotedblleft}倒带{\ textquotedblright}肽读取,获得众多独立读相同的分子,产生一个错误的速度\ < 10⁶在单一的氨基酸变异识别。这些概念验证实验构成承诺依据单分子蛋白质指纹识别和分析技术的发展。