用于核酸测序和单分子检测的基于纳米孔的传感器通常使用疏水外表面采用孔形成膜蛋白,适合插入脂质双层。相比之下,已证明含有亲水性孔隙的分子(例如DNA折纸)需要化学修饰以有利于插入脂质环境中。在这项工作中,我们描述了一种将带有内孔的极性蛋白插入脂质膜中的策略,并将其重点放在嗜热G20C门户网站蛋白的圆形12-亚基组件上。X射线晶体学,电子显微镜,分子动力学和热/交际变性实验都发现G20C门户蛋白具有高度稳定的结构,有利于纳米孔传感应用。在蛋白质中,卟啉与半胱氨酸突变体的缀合促进了蛋白质的插入脂质双层,从而使我们能够通过孔进行探测。最后,我们使用一系列不同尺寸的环糊精探测了门户的内部尺寸和形状,揭示了可能起源于门户的DNA键盘函数的不对称传输。